touchdownPCR-01

威健生技部落格搬到 新家 嘍!

目前舊的痞客邦已不再更新,

同文章請移至新網址 -> [試劑耗材]PCR實驗心法 : 遞減PCR (Touchdown PCR) - 排除非專一產物的小技巧

說到聚合酶連鎖反應(Polymerase Chain Reaction, PCR)技術

在分子生物學中就像吃飯睡覺一樣普遍

雖說原理和操作很簡單 但有時做起來卻又不容易成功

 

Tm值和primer的設計 以及樣本本身的品質

往往會影響到後續實驗的結果

 

然而在某些情況之下 即使注意到上訴所說的條件

因為目標序列和其他非目標序列太過相近

常常會有不專一的PCR產物產生

 

為了降低非專一產物來提高實驗Tm值

卻又不想因過高的Tm值造成產物量降低

所以發展出一種PCR技術 稱為 遞減PCR (Touchdown PCR)

 

遞減PCR (Touchdown PCR)

touchdownPCR-02

藍色 ->  目標序列  黑色 -> 非目標序列(其他雜質)

1. 先設定一組比較高的Tm值來提高目標的專一性結合

   經過幾個cycle的目標物放大 提高目標物在PCR反應中所佔比例

2. 在PCR後續cycle逐步降低Tm值 一直達到最適合的較低Tm值

3. 在此較低的Tm值進行目標產物的大量增幅

 

雖然此遞減PCR (Touchdown PCR)方法不是萬靈丹

但在某些非專一產物多或者目標物比例很少的實驗下

不仿也可以試試這種實驗方法 !

ps. 進行實驗時記得要找可以適用touchdown PCR的PCR儀器

文章標籤
創作者介紹

威健生技 Welgene Biotech Co., Ltd.

威健生技 Welgene 發表在 痞客邦 PIXNET 留言(1) 人氣()


留言列表 (1)

發表留言
  • 訪客
  • 您好 若是在幾個CYCLE數還是沒放大出目標片段 反而都是非專一性產物被放大 就代表PCR的材料都被分光了,那就算我提高CYCLE數放大出我要的目標片段 也還是很淡><
  • 若在前面幾個較高溫 cycle 的 annealing 步驟中, 仍只會將非專一產物放大的話, 就建議要從 primer 的設計去做改良~

    威健生技 Welgene 於 2014/12/04 15:35 回覆

找更多相關文章與討論